限制酶作用位点是什么?DNA连杆，是指用化学方法合成的一段由10～12个核苷酸组成的、具有一个或数个限制酶识别位点的寡核苷酸片段。限速酶调控位点丙酮酸激酶糖酵解过程中的限速酶之一丙酮酸激酶（pyruvate kinase,PK），别名丙酮酸磷转称酶、磷酸丙酮酸激酶，其分子式wieC9H9N，缩写式为ATP：丙酮酸-2-O-磷酸转移酶。在糖酵解系统里，它是催化形成第二个ATP反应的酶。EC2．7．1．40。能以磷酸烯醇（phosphoenolpyruv- ate）丙酮酸和ADP生成丙酮酸和ATP·ΔGo1=-7．5kcal。除需要二价金属离子外（Mg2+和Mn2+）外，还需要一价金属离子（K+．Rb+，Cs+），在生理上起作用的大概是K+。分子量约25万。是催化ADP为ATP的形成，结果是形成丙酮酸的终产物。基本信息中文名丙酮酸激酶外文名Kinase(phosphorylating), pyruvate别名丙酮酸磷转称酶磷酸丙酮酸激酶目录作用丙酮酸激酶使磷酸烯醇式丙酮酸和ADP变为ATP和丙酮酸，是糖酵解过程中的主要限速酶之一，有M型和L型两种同工酶，M型又有M1及M2亚型。M1分布于心肌、骨骼肌和脑组织；M2分布于脑及肝脏等组织。L型同工酶主要存在于肝、肾及红细胞内。心肌细胞坏死后，PK释放入血，PK的测定可用于诊断心肌梗死。限制酶的作用位点限制酶全称‘’限制性内切酶‘’，是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，其化学本质是蛋白质。限制酶的形式多样，从大小上来说，它们可以小到如Pvu II（157个氨基酸），也可以比1250个氨基酸的Cje I更大。限制酶作用在哪里限制酶（Restriction Enzymes）全称限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）:一种在特殊核甘酸序列处水解双链DNA的内切酶。Ⅰ型限制性内切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA的水解；而Ⅱ型限制性内切酶只催化非甲基化的DNA的水解。酶的催化位点Tm值适当高一些。现在大部分测序反应均选用耐热的测序级DNA聚合酶 来催化，并采用PCR的热循环程序。选用Tm值稍高一些，甚至退火温度 接近酶的最佳延伸温度的引物，有助于使反应顺利跨过待测模板的二级结构区，也有助于降低非特异反应。引物5’端引入限制性内切酶 位点：自从发现 Taq 酶具有非模板依赖的在新生成DNA链的3’末端加上一个A的特性以来，在引物5’端引入酶切位点从而方便后续克隆 步骤的方法的应用大大减少，取而代之的是利用带T载体 的粘端连接来包装PCR产物。若实验需要在引物5’端引入相关酶切位点时，除了需要清楚所选用的酶的识别序列之外，还需要了解此酶是否有位点优势效应，即酶的活性是否因为识别位点在序列的不同位置而不同，并根据此点来选择5’末端的保护碱基。此外保护碱基的另外一个作用就是保护酶切位点不被Taq 酶具有的微弱的5’→3’外切酶活性破坏。限制酶的酶切位点需要两分子水，游离的磷酸基团增加两个。限制酶作用于磷酸二酯键，使其断裂。水解一个磷酸二酯键需要消耗一分子水，质粒是环状的双链DNA，在某一位点切割，两条链的磷酸二酯键都要断裂一个，所以需要两分子水，断裂后一条链只有一端有一个游离的磷酸基团，两条链就有两个游离的磷酸基团。限制酶切位点是指DNA上可供限制酶切割的磷酸二酯键，如果已经切开，便不再是酶切位点了，而是粘性末端或平末端。一般给出一个碱基序列后，都会标出限制酶切割位点，用箭头标出。1.限制酶识别一个双链DNA序列，例如AACTGC，然后在特定的部位比如C和T之间切断。假如这一基因突变了，例如变成ATCTGC，那么限制酶就不能再识别这一序列，称之为“缺乏了某种限制酶的切点”2.基因突变导致其蛋白质产物发生改变，从而产生疾病限制酶的作用部位和作用结果基因工程中主要的工具酶有限制酶和DNA连接酶。限制酶的作用是切割目的基因两端，而DNA连接酶是将目的基因和运输体的黏性末端连接在一起。限制酶的作用位点在哪里区别：含义不同，作用不同。一、含义不同：核酸内切酶：在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶，与核酸外切酶相对应。核酸外切酶： 核酸外切酶是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键，降解核苷酸的酶。二、作用不同：核酸外切酶的作用：从核酸链的一端逐个水解下核苷酸。限制性核酸内切酶的作用：识别特定的核苷酸序列，并在DNA分子内部的一定位点切割DNA 。核酸内切酶：大都不具碱基特异性，但也有诸如脾脏RNase、RNaseT1等或限制性内切酶那种能够识别并切断特定的碱基或碱基序列的酶。限制酶连接酶等的作用及位点限制性内切酶：可以切割磷酸二酯键DNA连接酶：可以连接被限制酶切割开磷酸二酯键DNA聚合酶：使DNA两链中的H键结合解旋酶：使DNA两链中的H键断开 参考资料： 生物教材~~