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质粒dna的作用(质粒是dna)

质粒是dna基因工程的原料就是目的基因。所谓目的基因,就是指已被或欲被分离、改造、扩增和表达的特定基因或DNA片段,一般能编码某一产物或控制某一性状。目前获取目的基因的方法主要有三个,反向转录法、内切酶切割分离法和人工合成法。质粒是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体(或拟核)以外的DNA分子,存在于细胞质中,具有自主复制能力,使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息,是闭合环状的双链DNA分子。[质粒不是细菌生长繁殖所必需的物质,可自行丢失或人工处理而消除,如高温、紫外线等。质粒携带的遗传信息能赋予宿主菌某些生物学形状,有利于细菌在特定的环境条件下生存。质粒是什么从名字上就可以看出异同:同:都是作为载体,将目的序列递送到靶细胞内部。异:根本性质不一样:一个是质粒DNA,一个是病毒;进入细胞方式不一样:质粒通过转染进入目的细胞,病毒通过感染进入目的细胞,特异性更强,且效率更高;所搭载的序列形式及其发挥功能的方式可能不一样:质粒DNA所搭载的目的序列是DNA,并且DNA通常需要进入细胞核才能行使相应的功能;病毒载体搭载的序列可以是DNA,也可以是RNA,而RNA序列通常不需要入核行使功能,并且如果是进行宿主基因组的同源重组,病毒载体效率更高。包装方式不一样:质粒通常是在原核细胞内进行扩增后提纯;病毒载体通常在真核细胞内包装后逐步扩大培养后裂解细胞/收集上清后提纯获得。保存方式不一样:质粒通常稳定性非常好,对温度不敏感;病毒不一样,一般需要低温冷冻保存,对温度很敏感,反复冻融对活力影响也非常大。在疫苗应用中:质粒DNA作为DNA疫苗的载体,通常免疫原性较低,需要使用脂质体或者电击枪用于增强DNA进入细胞;病毒载体疫苗免疫原性较好,通常很容易诱导较强的抗体和T细胞免疫原性,但往往受限于预存免疫质粒是dna还是rna自主复制性;质粒DNA含有自己的复制起始位点以及控制复制频率的调控基因,有些质粒还携带特定的复制因子编码基因,形成一个独立的复制子结构。因此质粒DNA能够摆脱宿主染色体DNA复制调控系统的束缚而进行自主复制。可扩增性;在革兰氏阴性菌中,质粒的复制一般有两种形式,即严紧型复制和松弛型复制。严紧型质粒(如pSC101和p15A等)的复制由宿主细菌的DNA聚合酶3介导。在正常生长过程中,每个细胞通常只能复制少数几个质粒拷贝(1到5个);松弛型质粒(如pMB1和ColE1等)的复制需要半衰期较长的DNA聚合酶1、RNA聚合酶以及其他复制辅助蛋白因子的参与,当宿主细胞内蛋白合成减弱或完全中断时,质粒复制仍能持续进行,因此在每个宿主细胞中通常具有较高的拷贝数(30到50)。质粒是DNA双链吗线性DNA的电泳迁移速率比开环质粒DNA快。一、详细讲解如下:1、琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率与分子大小和构象相关,分子构象越大,摩擦阻力越大,第一条带是超螺旋带应该最亮,因为超螺旋结构完整紧密,跑得最快。2、第二条带为线性质粒是双链都断开变成松弛的线性DNA,不如超螺旋紧密,跑得相对慢 。第三条带为开环质粒,DNA双链的其中一根断开,导致超螺旋能量被释放而使质粒变成松弛的环状结构,结构臃肿,跑得最慢。3、由于摩擦阻力的问题,琼脂就像有孔海绵分子筛,细菌质粒提取中电泳会出现三条带,最快的是超螺旋带,它是完整的,因为它的构型紧密,跑得快。质粒是DNA片段吗重组DNA分子范围更广些。重组质粒是一种重组DNA。重组DNA分子可以有多种形式,运用不同的载体。质粒就是一种载体。其他的还可以有别的载体。重组质粒是重组DNA分子的一种。DNA分子是链状,而重组质粒是小型环状DNA。DNA重组:DNA分子内或分子间发生的遗传信息的重新共价组合过程。包括同源重组、特异位点重组和转座重组等类型,广泛存在于各类生物。体外通过人工DNA重组可获得重组体DNA,是基因工程中的关键步骤。质粒是DNA载体吗用作克隆载体的理想质粒一般具备下述特点: ①具有松驰型复制子(如ColE1),复制子(replicon)是质粒自我增殖所必不可少的基本条件,并可协助维持使每个细胞含有一定数量的质粒拷贝。 ②在复制子外存在几个单一的酶切位点(或多克隆位点),以便目的DNA片段插入。 ③具有插入失活的筛选标记,理想的质粒载体应具有两种抗菌素抗性标志,如氨苄青霉素抗性基因(Ampr)和四环素抗性基因(Tetr)等,以便从平板中直接筛选阳性重组子。 ④分子量相对较小和较高的拷贝数。此外,质粒的缺点是容量较小,一般只能接受小于15kb的外来DNA,插入片段过大会导致重组子扩增速度减慢,甚至使插入片段失活。

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