PCR缓冲液的作用PCR实验中的Mg2+是指镁离子，一般在反应缓冲液中均含有镁离子，镁离子与聚合酶结合降低聚合反应的活化能，可以调节镁离子浓度获得最理想的反应条件。pcr缓冲间的作用压力梯度在10Pa及以上1、原始试剂混配室应为正压间，在微环境百级超净台内操作，须防止其它程序功能间对本操作间的污染。 2、DNA提取室应为微负压间，须设置排风系统，以防止核酸提取时可能产生的气溶胶对人员的侵害和对其它程序功能间的扩散污染。 3、PCR扩增室应为微负压间，须设置排风系统，以防止大量扩增产物对其它程序功能间的扩散污染。 4、检测室应为微负压间，须设置排风系统，以防止扩增产物在电泳测序过程中的扩散污染。同时因3130分析仪散热量较大，会提高室内温度3-5℃。5、试剂混配室、DNA提取室、PCR扩增室、检测室如设置缓冲间，功能间内可均为正压，而在缓冲间内设置负压，气流从其双道门的门缝处分别向缓冲间内流动，用合理的气流组织方式避免各功能间的交叉污染。pcr缓冲液的作用是什么PCR反应中缓冲液是一个重要的影响因素，特别是其中的Mg2+能影响反应的特异性和扩增片段的产率。目前最为常用的缓冲体系为l0～50mmol／L的Tris—HCl(pH8．2～8．3，20℃)，PCR标准缓冲液含有10mmol／L的Tris—HCl(pH8．3)、50mmol／L的KCl、1．5mmol／L的Mg2+、0.1g／L的明胶。在一般的PCR反应中，1．5～2．0μmol／L Mg2+是比较合适的(对应dNTP浓度为200μmol／L左右)。Mg2+过量能增加非特异扩增并影响产率。现在认为限制KCl和明胶的用量值得提倡，尤其是BSA，虽其对酶有一定保护性，如果质量不好将起相反的作用，建议使用乙酰化的BSA。KCl在50mmol／L时能促进引物退火，大于此浓度时将会抑制聚合酶的活性。有的反应液以氯化铵或醋酸铵中的NH+才代替K+，其浓度为16．6mmol／L。在PCR中使用10～50mmol／L Tris HCl，主要靠其调节pH使Taq DNA聚合酶的作用环境维持偏碱性。Tris缓冲液是一种双极化离子缓冲液，pKa为8．3(20℃)，△pKa为一0.021／℃。在反应体系中加入适量(10％)的二甲基亚砜(DMSO)，虽然DMSO对聚合酶活性有一定抑制作用，但它可减少模板二级结构，提高PCR反应特异性。有报道指出甲酰胺或氯化四甲基铵(TMAC)均可提高反应特异性，而对酶活性没有明显影响。PCR标准缓冲液对大多数模板DNA及引物都是适用的，但对某一特定模板和引物的组合，标准缓冲液并不一定就是最佳条件，因此各实验室可在此条件上，根据具体扩增项目进行改进。其中Mg2+浓度对扩增作用的特异性和产量有明显影响。Taq酶是一种Mg2+依赖酶，Mg2+浓度一般为1．5mmol／L左右，Mg2+浓度过低时，酶活力明显降低；过高时，酶可催化非特异性扩增。由于反应体系中的DNA模板、引物和dNTP都可能与Mg2+结合，因此降低了Mg2+的实际浓度。所以建议反应中Mg2+用量至少要比dNTP浓度高O．5～1．0mmol／L。pcr反应液缓冲液就是给PCR提供的一个最适酶催反应条件。不同公司的buffer缓冲液都是不一样的，像离子浓度、PH等都有很大的差别。我们实验室用的是诺唯赞的PCR酶，上次我好奇打了他们的技术热线，大概都有些KCl、MgCl2、(NH4)2SO4、Tris-HCl等。 希望对你有帮助！pcr缓冲液是什么PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。 镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分： 1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系； 2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子； 3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整； 4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。 缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。pcr缓冲液的作用原理这不是绝对的。有时候当pcr检测对象多，但所用引物、聚合酶、水、缓冲液都一样，仅仅是模板不同时，可以配置一个不含有模板的大反应系统，然后分装到各个反应tube中，最后加入模板。这样简单，方便，省事省时。为了确保所有tube能分到足够的反应液，通常会多配制一点点反应液，以防取样器取样时误差与粘连导致的损失。pcr缓冲液的作用有哪些缓冲液有聚合酶需要的镁离子，还可以使反应体系处于酶反应时适合的PH，实际上就是给酶创造一个最适合的反应环境以使它的活性能达到最佳状态，如果你不加buffer，酶是没有活性的。一般酶和缓冲液是配套的，买酶的时候是在一起的
