多克隆位点的特点基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，而基因表达载体的本质是DNA，组成元素有碳氢氧氮磷，其中氮在含氮碱基中，磷在磷酸基团中完整的表达载体必须包括：1、复制子,在细菌中扩增时所必须.2、启动子,目的基因在细菌或细胞中转录所必须,转录了才能翻译,是谓“表达”.3、原核筛选标记,细菌增菌所必须.4、真核筛选标记,如果是真核表达,就是必须的.5、多克隆位点,即酶切位点,插入目的片段的区域.6、其他所需构件,可视实验设计情况而选用现成载体或在载体上自行添加.另：表达的起始和终止,在目的基因上附带起始密码子和终止密码子. 多克隆位点的特点不包括把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA 技术中常用的载体。质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天然质粒相比，质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量尽可能减少，以便于基因工程操作。大多质粒载体带有一些多用途的辅助序列，这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、产生用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA序列、鉴定片段的插入方向、外源基因的大量表达等。一个理想的克隆载体大致应有下列一些特性：（1）分子量小、多拷贝、松弛控制型；（2）具有多种常用的限制性内切酶的单切点；（3）能插入较大的外源DNA片段；（4）具有两个以上的遗传标记物，便于鉴定和筛选。（5）对宿主细胞无害。常用的质粒载体大小一般在1kb至10kb之间，如PBR322、PUC系列、PGEM系列和pBluescript（简称pBS）等。什么是多克隆位点ptrv2载体是由Clontech公司出品的哺乳细胞表达载体，Clontech货号为6084-1.pEGFP-C1载体含有一个EGFP荧光蛋白序列，在哺乳动物细胞中能够表达出来EGFP荧光蛋白。该载体在大肠杆菌中扩增时抗性为Kana，转染哺乳动物细胞后使用G418筛选表达细胞株。多克隆位点是外源DNA科技名词定义中文名称：克隆位点英文名称：cloning site定义1：重组DNA技术中，克隆载体上插入外源基因的部位。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；方法与技术（二级学科）定义2：载体DNA分子中惟一可插入外源DNA片段的限制性内切酶位点。也指插入序列转座元件的整合位点。应用学科：遗传学（一级学科）；分子遗传学（二级学科）以上内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布多克隆位点和单克隆位点单抗是针对单一抗原决定簇的，也就是说一个单抗最多只能结合2个抗体，当然不容易发生凝集反应和沉淀反应了。多抗有多个抗原结合位点，可以与多种抗原结合，比较容易发生凝集反应和沉淀放应多克隆位点和酶切位点限制性内切酶识别特定的DNA序列，除此之外，酶蛋白还要占据识别位点两边的若干个碱基，这些碱基对内切酶稳定的结合到DNA双链并发挥切割DNA作用是有很大影响的，被称为保护碱基。原理：在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即保护碱基，用来提高将来酶切时的活性。其次，在分子克隆实验中选择载体的酶切位点时，相邻的两个酶切位点往往不能同时使用，因为一个位点切割后留下的碱基过少以至于影响旁边的酶切位点切割。添加原则：添加保护碱基，需要考虑两个因素：一是碱基数目，一是碱基种类。添加保护碱基时，最关心的应该是保护碱基的数目，而不是种类。什么样的酶切位点，添加几个保护碱基，是有数据可以参考的，见附表。添加什么保护碱基，如果严格点，是根据两条引物的Tm值和各引物的碱基分布及GC含量。如果某条引物Tm值偏小，GC%较低，添加时多加G或C，反之亦反。载体上多克隆位点的作用把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA 技术中常用的载体。 　　质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天然质粒相比，质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量尽可能减少，以便于基因工程操作。大多质粒载体带有一些多用途的辅助序列，这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、产生用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA序列、鉴定片段的插入方向、外源基因的大量表达等。一个理想的克隆载体大致应有下列一些特性：（1）分子量小、多拷贝、松弛控制型；（2）具有多种常用的限制性内切酶的单切点；（3）能插入较大的外源DNA片段；（4）具有两个以上的遗传标记物，便于鉴定和筛选。（5）对宿主细胞无害。常用的质粒载体大小一般在1kb至10kb之间，如PBR322、PUC系列、PGEM系列和pBluescript（简称pBS）等。 多克隆位点是什么载体构建是分子生物学研究常用的手段之一。主要包括已有载体多克隆位点MCS的改造和已有载体启动子、增强子、筛选标记等功能元件的改造。载体构建完成后可利用PCR原理进行测序验证。载体 ，指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。什么是质粒的多克隆位点目的基因一般是插入质粒的多克隆位点，这里含有多种人工构建的限制酶酶切位点，方便进行克隆。例如，如果运载体是质粒，受体细胞是细菌，一般是将细菌用氯化钙处理，以增大细菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌的繁殖速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。